小鼠原代免疫細(xì)胞的精準(zhǔn)基因編輯可直接操控免疫關(guān)鍵分子，實(shí)現(xiàn)功能與信號通路的快速驗(yàn)證，在保留細(xì)胞生理特性的同時避免了耗時的轉(zhuǎn)基因動物構(gòu)建。然而，這一研究利器長期受困于技術(shù)瓶頸——傳統(tǒng)的慢病毒、電穿孔和脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染系統(tǒng)在遞送 Cas9/sgRNA 核糖核蛋白（Cas9-RNP）復(fù)合物時效率低下，且嚴(yán)重?fù)p傷細(xì)胞活力。西湖凝聚體與西湖大學(xué)聯(lián)合開發(fā)的 ProteanFect CRISPRMax Ultra 小鼠免疫細(xì)胞轉(zhuǎn)染試劑盒，通過創(chuàng)新的生物分子凝聚體技術(shù)，遞送 sgRNA 與重組 Cas9 蛋白 RNP 進(jìn)入小鼠免疫細(xì)胞并實(shí)現(xiàn)高效基因編輯，為免疫學(xué)研究提供了突破性解決方案。同時，整個過程簡單高效，且無需 sgRNA-Cas9 提前孵育，使原代免疫細(xì)胞轉(zhuǎn)染像 HEK293 細(xì)胞系一樣容易！

ProteanFect CRISPRMax Ultra 基因編輯機(jī)制

ProteanFect 遞送系統(tǒng)實(shí)現(xiàn)基因編輯的分子機(jī)制如下（圖1）：

1、Cas9 蛋白、sgRNA與 ProteanFect 內(nèi)源蛋白一起組裝成為 Cas9 RNP-凝聚體復(fù)合物；

2、Cas9 RNP 通過 Proteanfect 遞送進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)；

3、Cas9 RNP 復(fù)合物被 Proteanfect 釋放并進(jìn)入細(xì)胞核與靶 DNA 結(jié)合；

4、精準(zhǔn)切割靶基因，實(shí)現(xiàn)高效基因編輯。

圖1. ProteanFectCRISPRMax Cas9RNP遞送原理

這種遞送策略極大避免了電穿孔等物理方法對細(xì)胞膜的損傷，以及病毒載體可能引起的免疫原性問題，同時實(shí)現(xiàn)了比直接遞送 RNP 蛋白更高的編輯效率。

ProteanFect CRISPRMax Ultra遞送系統(tǒng)：效率與細(xì)胞活性的平衡：

無需預(yù)組裝，凝聚體作為高效生物反應(yīng)器，制備過程中，一分鐘之內(nèi)即可完成快速組裝；

無需入胞后翻譯成蛋白，快速進(jìn)入后直接進(jìn)行基因編輯；

不依賴于持續(xù)激活，能保持穩(wěn)定的編輯效率；

高效實(shí)現(xiàn)小鼠原代T細(xì)胞、NK細(xì)胞、γδ T細(xì)胞、Treg細(xì)胞等免疫細(xì)胞的基因編輯。

實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)：小鼠原代T細(xì)胞中的超高效基因編輯ProteanFect CRISPR Ultra 小鼠免疫細(xì)胞轉(zhuǎn)染試劑盒對小鼠原代 T 細(xì)胞進(jìn)行基因編輯：采用 TracsgRNA/Cas9 RNP 轉(zhuǎn)染的方案，結(jié)果如下圖1所示。基因組水平檢測（圖2左）顯示小鼠 T 細(xì)胞整體 Trac 敲除率達(dá)83.5%，蛋白水平檢測（圖2右）顯示 Trac 敲除效率達(dá)93.0%。

圖2. 使用ProteanFect CRISPRMax Ultra小鼠免疫細(xì)胞轉(zhuǎn)染試劑盒對小鼠原代T細(xì)胞進(jìn)行基因編輯

突破傳統(tǒng)：ProteanFect CRISPRMax Ultra與其他CRISPR方法對比

表1. ProteanFect與傳統(tǒng)CRISPR方法對比

全·球首·創(chuàng)：基于生物分子凝聚體的分子遞送技術(shù)

ProteanFect 凝聚體技術(shù)：ProteanFect CRISPRMax 采用了一種創(chuàng)新的生物分子凝聚體技術(shù)：ProteanFect蛋白分子能夠在體外與核酸、蛋白等自組裝成高度規(guī)律的球體結(jié)構(gòu)，這種自組裝而成的ProteanFect-核酸/蛋白復(fù)合物能夠通過細(xì)胞的主動攝入高效進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)，迅速釋放核酸分子，實(shí)現(xiàn)基因表達(dá)，同時天然降解其余蛋白。

圖3. ProteanFect核酸遞送原理示意圖(以遞送核酸為例)

ProteanFect CRISPR Ultra小鼠免疫細(xì)胞轉(zhuǎn)染試劑盒——一步到位的基因編輯解決方案

使用便捷：試劑盒中包含陽性對照，您只需準(zhǔn)備sgRNA即可開展實(shí)驗(yàn)

即開即用：所有組分已優(yōu)化配比，無需繁瑣調(diào)試

高效可靠：標(biāo)準(zhǔn)化流程確保實(shí)驗(yàn)結(jié)果穩(wěn)定可重復(fù)

全·程無·憂：提供詳細(xì)操作指南和一對一技術(shù)支持

ProteanFect 助您輕松實(shí)現(xiàn)小鼠免疫細(xì)胞的精準(zhǔn)基因編輯。如需了解更多技術(shù)細(xì)節(jié)或產(chǎn)品信息，可聯(lián)系華雅思創(chuàng)生物。